檢測前準(zhǔn)備工作：

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液?？蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

樣品收集、處理及保存方法：人成纖維細(xì)胞活化蛋白(FAP)ELISA試劑盒

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品：

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

人成纖維細(xì)胞活化蛋白(FAP)ELISA試劑盒操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

ELISA實(shí)驗(yàn)中一般需要4次加樣，即加標(biāo)本、加檢測抗體、加底物和加終止液。實(shí)驗(yàn)室使用的微量加樣器應(yīng)注意保樣并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會(huì)導(dǎo)致最后讀書差別，因此避免儀器帶來誤差。上海軒澤康生物特為您準(zhǔn)備加樣注意事項(xiàng)：

1.     加樣前：溶液應(yīng)充分混勻。加樣時(shí)避免90度向孔中滴加液體，否則會(huì)導(dǎo)致液體殘留再吸頭上，從而導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確。正確的加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。

2.     加樣時(shí)：避免速度過快，否則無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性；避免液體濺出；

3.     加樣品時(shí)：單孔用量要求：≥50微升/指標(biāo)，如需要做2個(gè)復(fù)孔則血量≥100微升/指標(biāo)。

4.     每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個(gè)孔顯色時(shí)間相同。

5.     如果移液槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應(yīng)記錄實(shí)驗(yàn)。

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